巴西橡胶树剥皮再生及乳管发生的研究张治礼1郝秉中2华南热带农业大学研究生处海南儋州571737；中国热带农业科学院橡胶栽培研究所，ppm、农业部热带作物栽培生理学重点开放实验室海南儋州571737）果表明：（1）巴西橡胶树茎干小面积剥皮后，新皮再生经过愈伤组织形成和维管形成层发生2个阶段。愈伤组织由靠近伤口表面未成熟的木薄壁组织细胞和木射线细胞分裂产生，维管形成层在愈伤组织内层发生，且是一个渐进的过程。（2）愈伤组织细胞不能分化形成乳管细胞。f生皮中*初形成的乳管组织从新形成的维管形成层细胞分裂产生，成列分布，并具有不同程度的密集紊乱现象，新生皮中第二列乳管正常。剥皮后用透明的或黑色的塑料薄膜包裹对乳管发生没有明显的影响。

　　中图法分类号794.1剥皮再生实验是研究树木维管组织分化的一个较好的实验系统。巴西橡胶树的次生乳管来源于维管形成层，剥皮再生实验将有助于对巴西橡胶树乳管发生和维管组织分化的深入了解。

　　本研究采用光学显微镜技术对巴西橡胶树茎干小面积剥皮后新皮再生过程进行了系统的观察，其中特别注意了乳管发生和维管组织分化。

　　1材料和方法1.1材料选取直径10~20cm长势良好的巴西橡胶树（i/ereafcrasi/ie/wisMuell.Arg.）无性系RRIM600植株作为实验树，分别于1995年3月上旬至9月上旬进行茎干剥皮处理，伤口大小为2.5cmx2.5cm.共进行6组重复实验，每组剥皮50株。每一树干同一篼度的不同侧面分别作3个剥皮伤口，其中1个完全暴露于空气中，另外2个分别用透明和黑色塑料薄膜包裹。制作切片的材料分别按以下时间顺序采取：剥皮后2，4，7，14，21，30，60，120d，每次取样都在不同的5株实验树上进行。

　　1.2材料处理及观察%乙醇或FAA固定，乙醇系列脱水，碘溴处理方法显示乳管4，石蜡包埋，固绿或铁矾-苏木精染色，切片厚度16urn，光学显微镜观察。

　　2结果2.1不同时期剥皮处理植株的树皮再生不同时期剥皮处理的6组300株植株，完全暴露在空气中的伤口表面迅速变干，2d后出现点线状分布的黑色粉状物（似为霉菌侵染），7d内迅速扩散，伤口变黑死亡。

　　切割后立即覆以透明塑料薄膜，剥皮后24h观察，发现伤口表面稍干燥，白中泛黄，有明显的纵向深色条纹；剥皮后4d，伤口表面黄中泛绿，有少量的粉状突起呈明显的纵行排列；剥皮后7d，伤口表面呈黄绿色并有不同程度的均匀隆起，表面粉状堆积物已不明显；随后伤口逐渐变为浅绿色、绿色和棕色。60d时，伤口表面为一薄层棕色物覆盖，里面的新皮为绿色。剥皮后120d，再生皮厚度已与原生皮相似。大部分剥皮处理中，伤口表面均遭受不同程度的霉菌侵染，但侵染蔓延缓慢，大都于7d后消失，对再生影响不大。

　　黑色塑料薄膜包裹的伤口，开始几天表面呈苍白色，以后逐渐变成黄白色、浅棕色、棕色，伤口表面的粉状堆积物明显多于透明塑料薄膜包裹下的伤口。与透明塑料薄膜包裹相似，剥皮后60d伤口表面也为一薄层棕色膜覆盖，但里面的新皮为浅黄色，新皮的厚度明显大于透明塑料薄膜包裹条件下的再生新皮。

　　6组试验中，不同季节处理表现出再生难易的差异。在巴西橡胶树展叶期至**蓬叶稳定后30d左右即4~6月份剥皮，只有50 %左右能够完全再生；6月中旬至9月份剥皮，大都再生良好。

　　2.2剥皮再生过程中组织的分化2.2.1刚剥皮的伤口剥皮后立即取样观察，在横切面上看到伤口表面凹凸不平并且残留有少量的破碎细胞。维管形成层大都被剥离，伤口表面由排列规则、细胞壁较薄的未成熟的木薄壁组织细胞和木射线薄壁组织细胞构成，在木薄壁组织中间有时有直径很大的未成熟的导管分子，个别伤口表面尚存有少量的维管形成层细胞和韧皮部细胞。

　　2.2.2愈伤组织的形成黑色和透明塑料薄膜包裹的伤口表面，未成熟的木薄壁组织细胞和木射线薄壁组织细胞能恢复分裂能力向外产生愈伤组织。但黑色塑料薄膜包裹较有利于愈伤组织的产生。'在透明塑料薄膜包裹下，剥皮后24h，靠近伤口表面的一些细胞的细胞壁稍内缩；剥皮后2d，伤口表面未成熟的木薄壁组织细胞稍膨大呈近似圆形，木射线薄壁组织细胞的形态也发生变化；如果用黑色塑料薄膜包裹，伤口表面的木射线薄壁组织细胞已经进行了几次平周分裂。剥皮后4d，未成熟的木薄壁组织细胞和木射线薄壁组织细胞都已经进行了平周分裂并产生若干薄壁细胞，这些细胞再进行平周和垂周分裂产生大量排列不规则的愈伤组织。14d后，愈伤组织不再增加，但愈伤组织的内部开始出现组织分化。

　　2种塑料薄膜包裹，伤口表面细胞的变化和愈伤组织的形成过程基本一致，但黑色塑料薄膜包裹下，愈伤组织形成的速度较快，厚度较大，剥皮14d时约为透明塑料薄膜包裹的2倍。

　　2.2.3形成层发生维管形成层在愈伤组织里层发生。透明塑料薄膜包裹条件下，剥皮后14d，靠近木质部的愈伤组织里层，一些愈伤组织细胞开始进行有规则的平周分裂，形成一些扁平的细胞，它们构成了早期的维管形成层区（图版-1）。同1个剥皮伤口，维管形成层区的出现是不同步的，有些区域出现较早而有些区域出现较迟。剥皮后21d，维管形成层区逐渐变宽，外侧已有早期的韧皮部分子和乳管细胞产生（图版-2，4），维管形成层区内已经具有扁平的典型纺锤状原始细胞，但区内往往还有一些形态不规则的薄壁细胞。维管形成层区射线原始细胞的分化往往比纺锤状原始细胞要慢一些。剥皮后28d，维管形成层已基本正常，其外侧开始出现典型的筛分子和伴胞，内侧开始出现导管（图版-3）。

　　黑色塑料薄膜包裹下，维管形成层发生的时间虽稍迟，但14d时也都有了维管形成层的分化，只是分化程度上稍差。

　　木栓形成层发生的时间一般晚于维管形成层。在剥皮后21d，随着维管形成层区的加宽，木栓形成层才开始出现；在此之前通常看不到木栓形成层的分化。不同季节、不同处理对维管形成层和木栓形成层的发生没有明显的影响。

　　2.2.4石细胞分化随着维管形成层的发生和活动，愈伤组织细胞开始分化形成石细胞。

　　笔者注意到，愈伤组织内石细胞开始分化的时间与维管形成层开始发生的时间是一致的，即维管形成层发生之前，愈伤组织内没有组织分化的迹象；剥皮后14d即维管形成层发生时，愈伤组织内的一些薄壁细胞才开始分化形成石细胞。愈伤组织分化形成的石细胞与正常巴西橡胶树树皮中的石细胞相似，都属于短石细胞类型。

　　石细胞主要分布在**列乳管与木栓形成层之间的愈伤组织中，维管形成层与木质部间的愈伤组织中仅具有细胞壁加厚的细胞，没有石细胞。

　　2.2.5乳管发生新生乳管组织出现在剥皮后21d，即再生维管形成层发生初期及之前都没有乳管组织出现。*先出现的乳管组织成列分布，具有不同程度的密集紊乱现象（图版-4，5）。这种乳管列不是由一列乳管细胞而是由1至多列乳管细胞紧密排列构成。乳管列是不连续的，往往被几个薄壁细胞隔开，这些薄壁细胞有些明显属于再生维管形成层分裂产生的射线细胞，有些虽不具备射线细胞的典型特征，但大都位于木射线细胞的延伸位置上。在沿茎的半径纵切面上，乳管细胞的形态与周围明显伸长的薄壁组织细胞相似，相邻乳管细胞之间的细胞壁清晰可见，细胞核位于乳管细胞的中央（图版-4）。有些已经具有典型的筛分子及伴胞。紧靠乳管列的外侧，分布有大量的石细胞。剥皮后60d，**列乳管内侧已经出现大量典型的筛分子和伴胞，有些已经形成第二列乳管。第二列乳管仅由一列乳管细胞构成，属于正常的次生乳管列。

　　2种塑料薄膜包裹，乳管细胞出现的时间、乳管细胞的形态和分布没有表现出明显的差异，不同季节剥皮对乳管发生也没有明显的影响。

　　热带作物学报21卷2.2.6剥皮伤口再生皮与原生皮的联系伤口边缘原生皮的切面上，也形成愈伤组织，并接着形成维管形成层和木栓形成层，使原来树皮中的组织与剥皮伤口中间相同的组织联系起来形成一个整体。

　　伤口边缘原生皮中剥皮后新形成的乳管列与再生新皮中的**列乳管相连。

　　这种伤口边缘的原生皮中，新形成的乳管列与再生新皮中的**列乳管相似，也表现为乳管密集。剥皮时，伤口边缘已经形成的乳管膨大死亡。在树皮横切面上，乳管膨大死亡的范围约1~4mm；剥皮后新形成的密集乳管的范围与这个范围基本相同（见）。

　　3讨论3.1不同时期皮对再生的影响根据过去的实验'树木剥皮后再生的成败主要与剥皮的季节、方法、形成层的活动状态、温度和湿度等条件有关。本实验结果表明，在1a中，6月中旬至9月份剥皮再生较好，已知这段时间巴西橡胶树的形成层细胞正处于活跃分裂的时期贮藏营养物质（特别是淀粉）开：冶在维管组织特别是木质部中积累。在形成层活动期剥皮时，形成层细胞通常都被剥去，组织再生发生在幼嫩的木质部细胞区，在Acacia的正常枝条中木检形成层活动依赖于维管形成层活动。

　　巴西橡胶树剥皮时，木栓形成层的发生一般都晚于维管形成层，木栓形成层的发生与维管形成层的发生是否有一定的因果关系尚不清楚。

　　石细胞是巴西橡胶树树皮中一种重要的细胞类型。愈伤。组织中石细胞的分化与维管形成层的发生和活动在时间上的一致性表明，石细胞的分化可能与维管形成层的发生有一定的关系。

　　3.3剥皮后再生乳管的特点本研究一个重要的发现是，再生新皮中*初形成的乳管列通常呈不同程度的密集紊乱状态。从这种乳管列发生的时间、位置和细胞特征判断，笔者认为它们来源于剥皮伤口再生的维管形成层：（1）这些乳管发生在维管形成层发生之后，维管形成层发生之前的愈伤组织中一般没有乳管细胞；（2）在这些乳管的外侧，一般都具有BrWn等描述的受伤后再生形成层细胞产生的过渡状态的韧皮部分子，而且在有些材料中，靠近乳管细胞的外侧已经具有了典型的筛分子和伴胞；（3）与正常的次生乳管列类似，这种剥皮后再生的乳管列在横切面上是不连续的，有些乳管细胞之间的薄壁细胞已经具备典型的射线细胞特征。

　　*先出现的乳管列不但具有不同程度的密集紊乱现象，乳管细胞本身也具有许多与正常次生乳管细胞不同的特征。在纵切面上，这些乳管细胞形态上相似于周围伸长的薄壁组织细胞，相邻乳管细胞间的细胞壁清晰可见，细胞核位于乳管细胞的中央等。这些原始特热带作物学报21卷征表明，早期形成的乳管细胞可能属于过渡状态的类型。

　　笔者特别注意到，密集乳管不但在剥皮伤口中形成，而且也在剥皮伤口周围定范围的原生皮中形成，同时，正好在这个范围内，原生皮中剥皮时已形成的乳管列细腠发生膨大死亡。吴继林等也发现，割胶树再生皮和针刺伤口的周围有乳管密集现象，但密集乳管形成的原因尚不清楚。

　　致谢在实验过程中，得到了吴继林、谭海燕和田维敏老师的热心指导和帮助，特此致谢。