吗啡是一种药物，在临床中应用很广。同时也是一种毒品，对它的检测有重要意义。Evangelia等用激光诱导荧光毛细管电泳通过免疫分析对吗啡进行了检测，检测线范围是0.01285~2.85mg/L〔3〕。AokiKimiko等用有色胶乳颗粒的凝集反应对尿样中的几种物质：脱氧麻黄碱、可卡因和吗啡同时测定。这一方法可在20min左右完成测定，检测限可到1X106g/nL.由于吗啡等药物的常规检测越来越多，目前趋向于采用试剂盒的方法，Dennis等研究比较了目前正在试制中的吗啡试剂盒的检测效果M.上述方法虽然有很高的灵敏度，但是分析过程繁琐，分析仪器不普及，不能适应临床中简便快速的要求。本文首次把胶体金引入到相变分离的免疫分析中，利用了胶体金快速稳定的物理吸附标记，省去了化学偶联的过程；利用胶体金自身的颜色，在可见吸收区域进行检测；同时利用温敏水凝胶的相变特点，进行异相快速分离，是很快捷的一种检测方法。此方法不需要复杂分析仪器，即使是滤光片分光的可见分光光度计就可以完成分析过程。所用试剂可以长时间保存，有利于实现分析方法的试剂盒化。检测范围可达到0. 10~100mgL检测时间可控制在5min以内，完全满足临床检测的要求。

　　吗啡抗原33胶体金标记吗啡-BSA全抗原胶体金是采用柠檬酸三钠还原法，还原氯金酸而得。制得的胶体金的吸收波长530nm.在常温下将胶体金加入到吗啡抗原中，几分钟后就可反应完毕。用胶体金标记相对于酶及荧光标记等方法，省去了化学键合的一步，使得对样品的快速检测成为可能。

　　34检测条件的确定在胶体金标记测定吗啡的实验中，影响检测结果的因素主要有检测波长、标记时的pH值，标记时所用的胶体金与吗啡抗原的相对含量、标记时反应和竞争免疫反应的时间以及水凝胶上的抗体含量等。

　　3.41检测波长的选择制备的胶体金的*大吸收波长550nm，与抗原结合后其*大吸收在530nm.而在这一波长范围内其它物质如蛋白质，尿样中未过滤掉成分都没有吸收，不会对测量产生干扰。选定吸收波长在530nm，属于可见区域，一般的光度计就可用来测量，对仪器要求简单。如用来定性，则肉眼就可以观察出差别。

　　3.4 2胶体金标记时pH值的确定溶液的pH值对胶体标记抗原的影响很大，测定了不同pH值下胶体金标记抗原在530nm的吸光度。实验表明在pH值为6~9时胶体金标记率*大，标记产物也*稳定。

　　3.4.3胶体金标记物含量的确定胶体金含量较标记抗原所需浓度较低时，会影响到*终检测时的灵敏度；胶体金含量高于所要求的浓度时会产生游离的胶体金，这部分胶体金由于没有蛋白质的保护容易沉降，低速离心即可除去。固定抗原的量，逐步增加胶体金的含量，合成出不同标记物与抗原配比的标记抗原，和一定量的抗体反应，测定在530nm吸收信号。

　　是吸光度对胶体金与吗啡抗原的含量比作图，所用BSA-吗啡全抗原的浓度是3.5gL胶体金浓度是8.由可见当胶体金含量是蛋白质的20倍时，胶体金在抗原上的吸附达到饱和，之后再增加胶体金的相对含量，检测信号基本不变，所以在测定中选择胶体金含量是抗原的20~25倍之间。

　　3.4 4反应时间的优化胶体金标记抗原的反应被认为是物理吸附，胶体金吸附蛋白质的特点是快速、稳定，实验证明当反应时间从5min延长到60min时，标记率没有可观察到的变化。71994-2014ChinaAcademicJournalElectronic胶沣金与抗珉的含量比吸光度与胶体金用量曲线分析化学当加入待测吗啡样品与标记吗啡进行竞争反应时，由于抗体是固定在具有温敏相变特点的水凝胶上，所以与一般的免疫测定反应不同，反应是在均相环境中发生，这样免疫反应的时间就大大缩短。在实验中我们对同一样品，在不同反应时间（5、10、15、20、30、40、60min）下反应，然后对其进行测定，测量结果完全在误差范围内。所以应用此方法，可以把测量时间控制3.4.5固定化抗体含量的确定固定化吗啡抗体含量减少时，加入低浓度的标记吗啡抗原，利用竞争反应，可测定较低含量的吗啡。当标记抗原的含量降低时，致使检测信号也随之降低，*终导致信号不可观察，利用此方法可测得的吗啡检测限是0. 10mgL此时固定吗啡抗体的含量是20mg/L.通常临床中有意义的检测吗啡浓度在1 ~20mgL此时固定化抗体浓度是3.5胶体金标记控温相变分离测定尿样中的吗啡吗啡属于外源性物质，在实际的药物检测中，服药者尿样中的吗啡及其可检测到的类似物的浓度在1~20mg/L之间。用胶体金标记，当吗啡浓度大5mg /L时，肉眼观察就可以进行快速的定性分析。结合简单的紫外-可见检测仪，可以对其进行定量的检测。在实际检测中，样品中的吗啡与金标吗啡相竞争与水凝胶固定的吗啡抗体反应，当待测吗啡含量加时，*终测得530nm吸收值就要降低。通过改变偶联到水凝胶上抗体的数量，可得到不同线性范围（0. 1~K*mg/L）的工作曲线；通过改变标记胶体金的数量，可得到不同灵敏度的工作曲线。考虑到待测样品中吗啡的含量，以及对测量精度的要求，选用如下的工作曲线：：5Dnm =0.388?0.019C（mg/L），线性范围是1~20mgL相关系数r=0.9984.对实际尿样中吗啡含量进行测定，取连续9次的测量值计算吗啡含量。吗啡标准含量是5. 89mgL测量浓度是5.42mgL相对标准偏差是7. 5%回收率是92%. 4结论本文通过将吗啡偶联到BSA上制得全抗原并免疫家兔得到多克隆抗体，再将抗体与水凝胶偶联。利用水凝胶温敏相变特性进行分离，以及用胶体金快速对抗原进行标记，并可以用胶体金的颜色进行定性，或者用紫外-可见吸收仪进行定量检测。本方法相对于荧光标记、酶标记免疫分析方法，在快速、简便特性上有明显的优势，针对实际尿样的分析，取得了满意的结果。

　　致谢尿样由兴奋剂检测中心提供，标准值为色质联用（GC-MS）仪器所测，谨致谢意。References吕伸等：吗啡的控温相分离胶体金标记免疫分析欢迎订购《二十一世纪的分析化学〉〉本书由汪尔康院士主编。分析化学界有11位院士和近20位学科带头人精心为本书撰稿。本书在融合各分支学科发展的基础上阐述了分析化学发展的总趋势，又着重在分支学科的层次上论及当前及进入21世纪后的发展趋势。本书内容体现了前沿性、先进性、创见性和代表性，不仅可供从事分析化学的科研和教学人员、分析测试科学工作者和大专院校分析化学专业的师生阅读；也可作为大学高年级课程及研宄生课教材。

　　尤其需要指出的是：本书对分析化学领域自然科学基金项目的申请，具有指导意义。

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